Введение. Разработка методов терапии заболеваний ретинального пигментного эпителия, в том числе трансплантации клеток, требует строгого подхода к морфологическому анализу данных. Основополагающим препятствием для иммуногистохимического исследования и микроскопии является наличие меланина, что актуализирует поиск оптимального метода депигментации, сохраняющего структуру клеток. Самым эффективным методом депигментации является протокол № 4. Цель исследования – провести сравнительный анализ методов депигментации нативных препаратов и 3D сфероидов ретинального пигментного эпителия для выявления наиболее эффективного и щадящего алгоритма. Материалы и методы. Исследовано влияние различных депигментирующих агентов на образцы ретинального пигментного эпителия. Критериями оценки служили степень удаления меланина, сохранность клеточной морфологии, уровень аутофлуоресценции и сроки проведения методик. Результаты. На основании комплексной оценки определены оптимальные протоколы химической депигментации для последующей конфокальной, световой и фазово-контрастной микроскопии. Заключение. Разработаны предпочтительные алгоритмы депигментации, обеспечивающие морфофункциональную сохранность ретинального пигментного эпителия и пригодные для детального микроскопического анализа, что формирует основу для стандартизации исследований в данной области.
Introduction. The development of treatment strategies for retinal pigment epithelium diseases, including cell transplantation approaches, requires a rigorous analysis of morphological data. A major limitation for immunohistochemical studies and microscopy is the presence of melanin, which necessitates the identification of an optimal depigmentation method capable of preserving cellular structure. The study aimed to conduct a comparative analysis of depigmentation methods for native preparations and 3D spheroids in order to identify the most effective and least damaging protocol. Materials and methods. The effects of various depigmenting agents on retinal pigment epithelium samples were investigated. The evaluation criteria included the degree of melanin removal, preservation of cellular morphology, autofluorescence levels, and the time required for the procedures. Results. We determined optimal chemical depigmentation protocols for subsequent confocal, light, and phase-contrast microscopy. Conclusion. We developed preferred depigmentation algorithms that ensure preservation of the morphofunctional properties of retinal pigment epithelium and are suitable for detailed microscopic analysis, thereby providing a basis for the standardization of research in this field. Keywords: retinal pigment epithelium, morphological study of retinal pigment epithelium, depigmentation of retinal pigment epithelium, age-related macular degeneration, morphological study of 3D spheroids